胶质纤维酸性蛋白的原核表达、纯化及鉴定

摘要：

目的 为获得高纯度的人胶质纤维酸性蛋白(GFAP).方法 从人脑胶质瘤组织中提取mRNA,采用RT-PCR的方法克隆GFAP基因全长序列,利用限制性内切酶EcoR I和Xho I将GFAP基因插入到原核表达载体pGEX4T2,对重组表达载体pGEX4T2-GFAP进行双酶切和测序鉴定.选择测序正确的质粒转化大肠杆菌BL21,用终浓度为1 mmol/L的异丙基-β-D-硫酸代半乳糖苷(IPTG)进行诱导表达GFAP-GST融合蛋白.经亲和层析纯化获得GFAP融合蛋白,并通过SDS-PAGE和western blot 进行鉴定.结果 重组质粒经双酶切和测序鉴定证实插入序列准确无误.宿主菌BL21经IPTG诱导表达并纯化得到目的 蛋白GFAP-GST融合蛋白,经SDS-PAGE鉴定分子量约为70～90 kD,符合预期,western blot证实该目的 蛋白能被特异性抗人GFAP多克隆抗体识别.结论 成功构建GFAP表达载体,并可通过原核表达获得高纯度的目的 蛋白,为进一步开展相关研究打下基础.

关键词：胶质纤维酸性蛋白、原核表达载体、表达

所属期刊栏目：14

分类号：R392.9

资助基金：国家自然科学基金30600635

在线出版日期：2009-12-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：606-609