小鼠硒蛋白mSelK基因敲减shRNA慢病毒重组载体的构建及鉴定

摘要：

目的:构建小鼠硒蛋白mSelK基因敲减shRNA慢病毒重组载体,以研究硒蛋白mSelK基因敲减对小鼠细胞株的影响,对研究硒蛋白mSelK的分子功能,尤其是在巨噬细胞等免疫细胞中的分子功能具有重要意义.方法:将初始载体pLKO.1-TRC中Age I和EcoR I酶切位点之间1.9 kb的插入片段切除,再插入mSelK的shRNA退火片段构建pLKO.1-mSelK-shRNA载体.将pLKO.1-mSelK-shRNA载体与包装质粒psPAX2、包膜质粒pMD2.G共同转染HEK-293T细胞,从而构建mSelK基因shRNA表达敲减慢病毒重组载体pLKO.1-mSelK-shRNA.用逆转录RCR(reverse transcription-PCR,RT-PCR)和Western blotting法考察mSelK表达敲减慢病毒载体对RAW264.7细胞中mSelK的敲减能力.结果:在单核细胞RAW264.7中mSelK的mRNA和蛋白含量显著降低,可以看出,慢病毒基因敲减mSelK的效果非常明显.结论:采用pLKO.1慢病毒载体表达系统成功构建了高效敲减小鼠硒蛋白mSelK的慢病毒重组载体pLKO.1-mSelK-shRNA,为进一步研究小鼠硒蛋白mSelK的分子功能奠定了实验基础.

关键词：分子生物学、小鼠硒蛋白、mSelK、shRNA、慢病毒载体

所属期刊栏目：11

分类号：Q782(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家自然科学基金;国家自然科学基金

在线出版日期：2021-11-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：265-270