鼻咽癌细胞中miR-9表达下调的甲基化机制研究
目的:研究miR-9在鼻咽癌细胞中表达下调是否与相应的编码基因启动子区DNA甲基化相关,明确miR-9表达失调的分子机制.方法:实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)检测分析正常鼻咽上皮细胞NP69和鼻咽癌细胞C666-1中加入去甲基化药物5-杂氮-2-脱氧胞苷(5-aza-2-deoxycytidine,5-AZA)(50μmol/L,连续作用72 h)(NP69/C666-15-AZA组)和去乙酰化酶抑制剂曲古柳菌素A(trichostatin A,TSA)(10 nmol/L,继续作用24 h)(NP69/C666-15-AZA+TSA组)后细胞中miR-9的表达变化.同时,利用CpG Island Searcher软件对hsa-miR-9的编码基因hsa-miR-9-1、hsa-miR-9-2和hsa-miR-9-3启动子区的CpG岛进行分析,应用重亚硫酸盐测序(bisulfite genomic sequencing,BGS)检测5-AZA和TSA对hsa-miR-9-1、hsa-miR-9-2、hsa-miR-9-3启动子区CpG岛甲基化程度的影响.最后,应用CCK-8细胞增殖实验、流式细胞术、Transwell侵袭实验分析5-AZA和TSA对C666-1细胞增殖、凋亡和侵袭能力的影响.结果:与NP69对照组相比,NP695-AZA组和NP695-AZA+TSA组miR-9的表达水平和hsa-miR-9-1、hsa-miR-9-2、hsa-miR-9-3的甲基化率均无显著变化(P>0.05).与C666-1对照组相比,C666-15-AZA组、C666-15-AZA+TSA组miR-9的表达水平分别上调11.31倍和22.63倍,差异有统计学意义(F=780.280,P=0.000).BGS结果显示,C666-1对照组、C666-15-AZA组和C666-15-AZA+TSA组hsa-miR-9-1的甲基化率分别为78.8％(67/85)、32.9％(28/85)和14.1％(12/85),hsa-miR-9-2的甲基化率分别为72.2％(39/54)、38.9％(21/54)和14.8％(8/54),hsa-miR-9-3的甲基化率分别为76.0％(133/175)、32.0％(56/175)和20.6％(36/175),差异均有统计学意义(χ2=77.324,P=0.000;χ2=36.850,P=0.000;χ2=122.407,P=0.000).5-AZA和TSA处理后,C666-1细胞的增殖和侵袭能力均显著下降(P<0.01).结论:鼻咽癌细胞中miR-9表达下调与编码miR-9的基因miR-9-1、miR-9-2和miR-9-3启动子区CpG岛的甲基化有关.
耳鼻咽喉科学、鼻咽癌、微小RNA、DNA甲基化、去甲基化药物
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R739.63(肿瘤学)
高等学校博士学科点专项科研基金20120201120087
2021-11-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共9页
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