小鼠肠道菌群胞外DNA的提取及指纹图谱分析

摘要：

肠道菌群胞外DNA(extracellular DNA,eDNA)是维持黏膜免疫稳态的重要分子,其主要来源目前尚不清楚.对肠道切片进行TOTO-1染色后用激光共聚焦扫描显微镜观察黏液层原位eDNA分布;并对其提取方法进行优化,制备正常(CT)和高脂饲料处理(high fat diet,HFD)C57BL/6J小鼠肠道eDNA,进行末端限制性片段多态性(terminal restriction fragment length polymorphism,T-RFLP)指纹图谱分析.结果表明,肠道切片黏液层存在丰富的eDNA.用含0.5 mmol·L?1二硫苏糖醇(DTT)的PBS缓冲液可充分回收黏液,两步酚提可高效制备黏液eDNA,用引物334F/939R进行16S rRNA基因PCR扩增,结合内切酶AluⅠ、DdeⅠ消化,为eDNA进行T-RFLP分析的优化参数.主成分分析(principal component analysis,PCA)结果显示eDNA和细胞内DNA构成存在显著差异.

关键词：食品营养学、小鼠、肠道菌群、细胞外DNA、T-RFLP

所属期刊栏目：9

分类号：R151(营养卫生、食品卫生)

资助基金：国家自然科学基金;国家科技支撑计划

在线出版日期：2021-11-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共10页

页码：1593-1602