人CD7胞外区慢病毒载体的构建及其稳转细胞系的构建、表达和纯化

摘要：

为筛选能够识别具有天然构象的CD7单克隆抗体或者纳米抗体,有必要建立CD7分子的分泌型表达哺乳动物稳定细胞株来纯化糖基化CD7抗原蛋白,以此作为抗体筛选用抗原.研究通过提取Jurkat细胞总RNA,经RT-PCR扩增获得目的片段CD7-EX,并直接构建到慢病毒载体上,从而获得了带有His标签的慢病毒重组表达载体pCDH-CMV-copGFP-CD7-EX.通过包装慢病毒,转染293T细胞系,命名为293T-GFP-CD7-EX.经Western blotting鉴定,该His-CD7-EX融合蛋白可与His标签抗体特异性结合,表明融合蛋白可在构建的细胞系中表达.然后用无血清培养基培养293T-GFP-CD7-EX细胞,收集培养上清,对上清进行亲和层析纯化,纯化产物经考马斯亮蓝染色鉴定后得到证实.结果显示,成功构建了能够持续分泌表达CD7胞外区片段的稳转细胞系,并经过纯化获得了CD7胞外区重组蛋白.

关键词：蛋白质工程、CD7胞外区(CD7-EX)、稳转细胞系、真核表达、蛋白纯化

所属期刊栏目：9

分类号：Q816(生物工程学(生物技术))

在线出版日期：2021-11-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：228-234