西洋参人参皂苷合成途径中原人参三醇合成酶基因CYP6H的克隆鉴定与功能分析

摘要：

通过对比美国国立生物技术信息中心(National Center for Biotechnology Information,NCBI)已发表的人参原人参三醇合成酶基因CYP716A53v2(GenBank登录号JX036031)和三七原人参三醇合成酶基因CYP450(GenBank登录号GU997670)的保守序列区设计简并引物,并对核心片段区序列进行cDNA末端快速扩增(rapid amplification of cDNA ends,RACE)的方式首次获得了西洋参中原人参三醇合成酶基因序列并命名为CYP6H.对CYP6H进行氨基酸序列分析和亲缘关系树分析,表明CYP6H为P450基因家族中的一种且与原人参三醇合成酶基因具有极高的相似性和亲缘关系.进一步通过体外异源表达的方式进行功能鉴定分析,利用基因重组的方法构建重组表达载体pAUR123-CYP6H,转染酿酒酵母菌构建具有异源表达功能的重组酵母菌,向培养基中加入前体物质原人参二醇后,经高效液相色谱法(high performance liquid chromatography,HPLC)检测发现菌液提取物中含有催化产物原人参三醇,证明CYP6H为西洋参中的原人参三醇合成酶基因并发表于GeneBank(登录号:KC190491).以pBI121为载体,利用基因重组构建CYP6H的RNA干扰元件pBI121-CYP6H-RNAi和超表达元件pBI121-CYP6H-overexpression,通过转化发根农杆菌A4构建重组工程菌后侵染西洋参从而诱导西洋参发根体系的生成,HPLC检测发根中各种单体皂苷的含量变化用以进行CYP6H在人参皂苷合成途径中的功能分析.

关键词：生物工程、P450、异源表达、原人参三醇、功能分析

所属期刊栏目：9

分类号：Q815(生物工程学(生物技术))

资助基金：高等学校博士学科点专项科研基金20120061110038

在线出版日期：2021-11-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

页码：219-227