大鼠膜联蛋白A2真核表达载体的构建及表达

摘要：

目的:克隆大鼠背根神经节膜联蛋白A2(annexin Ⅱ)的基因,构建真核表达载体并检测其表达.方法:以RT-PCR法扩增大鼠背根神经节(DRG)细胞中膜联蛋白A2(annexin Ⅱ)的基因,构建pGMT-Anxa2克隆载体,以此为模板插入flag标签扩增Anxa2-flag序列,将其定向插入真核表达载体pcDNA3.1(+),获得表达载体pcDNA3.1(+)-Anxa2-flag.以PCR、双酶切及序列测定法鉴定该质粒.以脂质体法将表达载体转染到HEK293细胞中,Western印迹和细胞免疫荧光检测annexinⅡ蛋白表达及细胞内定位.结果:PCR扩增Anxa2-flag片段大小与预期相同.通过PCR、HindⅢ和NotⅠ双酶切及测序鉴定,证明构建出了含大鼠annexinⅡ基因的真核表达载体.Western印迹和细胞免疫荧光的检测表明大鼠annexinⅡ基因稳定表达,并可在胞膜和胞质中广泛表达.结论:成功构建pcDNA3.1(+)-Anxa2-flag真核表达载体,并稳定表达蛋白,为研究annexinⅡ调控DRG伤害性感受传导的分子机制奠定基础.

关键词：背根神经节、膜联蛋白A2、真核表达载体、Western印迹、免疫荧光

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分类号：R49;R681.5(康复医学)

资助基金：国家自然科学基金资助课题30872732,81071597;山东省自然科学基金资助课题Z2007C04

在线出版日期：2010-12-06（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：937-941,952