人HSP75基因重组腺病毒载体构建及在C17.2神经干细胞的表达

摘要：

目的：构建HSP75基因重组腺病毒载体，观察HSP75蛋白在C17.2神经干细胞中的表达。方法采用PCR方法从含人HSP75基因质粒中扩增HSP75基因，连接到腺病毒穿梭质粒的多克隆位点区域，构建重组穿梭质粒pHBAd-MCM-HSP75-GFP，在LipofiterTM转染试剂的介导下与腺病毒辅助骨架质粒pHBAd-BHGloxΔE1,3 Cre共转染HEK293细胞，整合包装成重组腺病毒， TCID50法测定病毒滴度。使用荧光显微镜、流式细胞仪和Western blotting观察重组腺病毒在C17.2细胞中的感染情况及HSP75蛋白的表达水平。结果通过酶切鉴定、测序、PCR鉴定，HSP75基因已正确插入穿梭质粒中，并与病毒骨架质粒整合包装成重组腺病毒；重组腺病毒滴度为1.0×1010 PFU/ml；Western blotting检测，转染后的神经干细胞表达HSP75蛋白。结论 HSP75重组腺病毒载体成功构建，对C17.2神经干细胞具有较高的表达效力。

关键词：热休克蛋白75、重组腺病毒载体、C17.2神经干细胞

分类号：R741(神经病学与精神病学)

资助基金：1.国家自然科学基金项目No.30973162；2.广东省自然科学基金项目No.S2012010008199；No.S2013010015546。

在线出版日期：2015-04-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：264-268