10.3969/j.issn.1004-406X.2021.03.10
Notch1信号通路对小鼠触液神经元体外增殖能力的调节作用
目的:探讨Notch 1信号通路在调节小鼠触液神经元增殖中的作用.方法:(1)取出生24h内C57BL/6小鼠延髓组织,消化后提取细胞,经流式细胞分选得到触液神经元(cerebrospinal fluid-contacting neurons,CSF-cNs).将CSF-cNs悬浮培养并传代.(2)将CSF-cNs传至第2代,培养0h、24h、48h、72h、96h、120h时应用CCK-8法检测CSF-cNs光密度(optical density,OD)值,培养5d时应用免疫荧光检测CSF-cNs特异性标志物多囊肾病2型1通道蛋白(polycystic kidney disease 2 like 1,PKD2L1)与神经干细胞标志物Nestin、Sox2及增殖标志物Ki67共表达情况.(3)将第3代CSF-cNs分为4组:对照组、Jagged-l组、二甲基亚砜(dimethyl sulfoxide,DMSO)组、γ-分泌酶抑制剂(3,5-二氟苯乙酰基)-L-丙氨酰基-L-2-苯基甘氨酸叔丁酯[(3,5-difluorophenylacetyl)-L-alanyl-L-2-phenylglycine tert-butyl ester,DAPT]组.对照组采用无血清神经培养液培养;Jagged-1组采用无血清神经培养液+5μmol/L Jagged-1培养;DMSO组采用无血清神经培养液+0.05％DMSO培养;DAPT组采用无血清神经培养液+50μmol/L DAPT培养.培养0h、24h、48h、72h、96h、120h时应用CCK-8法检测各组CSF-cNs的OD值;培养5d时应用Western Blot检测各组CSF-cNs PKD2L1、Notch l、Notch受体胞内段(NICD)、Hes1、β-actin蛋白表达情况,应用免疫荧光法检测各组CSF-cNs增殖标志物Ki67蛋白荧光强度(arbitrary unit,A.U.)值.结果:(1)提取的细胞经流式细胞分选后得到的CSF-cNs纯度为(94.5±2.03)％,存活率为(93.64±2.35)％.CSF-cNs可连续传代并形成神经球.(2)第2代CSF-cNs培养0h、24h、48h、72h及96h时的OD值具有统计学差异(P＜0.05),96h与120h的OD值无统计学差异(P=0.44).CSF-cNs中PKD2L1可与Nestin、Sox2或Ki67共表达.(3)第3代CSF-CNS分组处理后各组细胞PKD2L1蛋白表达量无统计学差异(P=0.27).Jagged-1组细胞Notch l、NICD、Hesl蛋白表达量均较对照组升高(P＜0.01);72h、96h、120h的OD值较对照组均显著性升高(P72h=0.03,P96h=002,P120h=0.01);Ki67蛋白A.U.值较对照组显著性升高(P＜0.01).DAPT组细胞Notch l、NICD、Hesl蛋白表达量较对照组均显著性减低(P＜0.01);72h、96h、120h的OD值与对照组比较均显著性降低(P＜0.01);Ki67蛋白A.U.值较对照组显著性降低(P＜0.01).DMSO组各项指标与对照组比较均无统计学差异(P＞0.05).结论:CSF-cNs在体外具有神经干细胞潜能;激活Notch 1信号通路可增强CSF-cNs的增殖能力,抑制Notch 1信号通路可降低CSF-cNs的增殖能力.
触液神经元、神经干细胞、Notch1信号通路、增殖、大鼠
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Q507;Q813(一般性问题)
国家自然科学基金;贵州省自然科学基金[QKH-J20201Y323
2021-05-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共9页
262-270
