柚苷对髓核间充质干细胞生物学性能的影响及其相关机制

摘要：

目的:探讨柚苷对人退变腰椎间盘来源髓核间充质干细胞(human nucleus pulposus-derived mesenchymal stem cell,hNPMSC)生物学性能的影响及其可能机制.方法:收集腰椎间盘突出症患者的退变髓核组织,分离培养hNPMSC并进行体外扩增.通过细胞形态学观察、细胞免疫表型检测及三系分化进行间充质干细胞的鉴定.取P3代hNPMSC分为对照组(正常培养基培养)、柚苷组(以含20μg/mL柚苷的培养基培养)和LY294002组(用含20μg/mL柚苷及PI3K/Akt信号通路抑制剂LY294002的培养基培养),培养6d后通过流式细胞仪检测细胞凋亡率,TUNEL荧光检测TUNEL染色阳性细胞率,Western Blot检测凋亡相关蛋白Caspase-3、Bcl-2和Bax及PI3K/Akt信号通路相关蛋白p-Akt、Akt和p53的表达,RT-PCR检测Ⅱ型胶原及蛋白多糖的mRNA表达.结果:来自人退变腰椎间盘髓核的原代细胞贴壁生长,呈不规则多边形,传代后以梭形为主;高表达干细胞相关阳性表面抗原分子CD73、CD90及CD105,低表达CD45及CD34;茜素红染色、油红O染色及甲苯胺蓝染色证实经诱导后可向骨、脂肪及软骨细胞分化,符合间充质干细胞的表型.与对照组比较,柚苷组细胞凋亡率、TUNEL染色阳性细胞率、p53、Caspase-3和Bax蛋白表达显著性下降,p-Akt及抗凋亡蛋白Bcl-2表达显著性增加(P＜0.05);LY294002干预后可以逆转这种改变(P＜0.05).与对照组比较,柚苷组hNPMSC中Ⅱ型胶原及蛋白多糖的mRNA表达显著性增加;LY294002组中Ⅱ型胶原及蛋白多糖的mRNA表达较柚苷组显著性减少(P＜0.05).结论:柚苷可通过激活PI3K/Akt信号通路减少细胞凋亡,促进hNPMSC向髓核细胞分化.

关键词：髓核间充质干细胞、柚苷、椎间盘退变、凋亡、PI3K/Akt信号通路

所属期刊栏目：29

分类号：R681.5(骨科学（运动系疾病、矫形外科学）)

资助基金：国家自然科学基金81401830;江苏省青年医学人才项目QNRC2016342

在线出版日期：2019-06-04（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：364-370