大鼠骨髓间充质干细胞与髓核细胞共培养对白介素1β致髓核细胞退变的影响

摘要：

目的:观察大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)与髓核细胞(NPCs)共培养对白介素1β(IL-1β)致NPCs退变的影响.方法:在体外分别分离培养大鼠NPCs和BMSCs,分别传至第3代,采用流式细胞仪鉴定BMSCs纯度,分别测定CD29、CD31、CD45、CD90表型.取第3代NPCs分为3组:A组,无IL-1β干预,不与BMSCs共培养,设为对照组;B组,用IL-1β干预NPCs后不与BMSCs共培养;C组,用IL-1β干预NPCs后与BMSCs细胞借由transwell小室间接共培养.IL-1β干预时间和BMSCs共培养时间均为24h,之后取出transwell,将3组NPCs通过实时定量荧光PCR(RT-PCR)观察其解聚蛋白样金属蛋白-4(ADAMTS-4)、解聚蛋白样金属蛋白酶-5(ADAMTS-5)、基质金属蛋白酶-13(MMP-13)基因表达量,同时通过Annexin V-FITC/propidium iodide (PI)凋亡试剂盒和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)试剂盒观察3组NPCs凋亡情况.结果:流式细胞鉴定结果显示90％以上的BMSCs表现为CD29、CD90阳性,小于5％的BMSCs表现为CD31、CD45阳性,细胞纯度较好.3组NPCs中ADAMTS-4、ADAMTS-5、MMP-13的基因相对表达量:A组为0.98±0.19、1.10±0.08、1.21±0.24,B组为5.23±0.25、6.92±2.33、23.39±0.09,C组为2.31±0.26、3.33±1.52、12.68±0.11,与A组比较,B、C组均明显升高(P＜0.05),C组与B组比较均明显降低(P＜0.05).Caspase-3活性相对表达量A组为1.20±0.18,B组为5.92±0.93,C组为2.33±0.52,与A组比较,B、C组明显升高(P＜0.05),C组与B组比较明显降低(P＜0.05).细胞凋亡率A组为4.2±2.2,B组为17.1±3.7,C组为10.5±2.4,与A组比较,B、C组明显升高(P＜0.05),C组与B组比较明显降低(P＜0.05).结论:与BMSCs共培养可有效降低IL-1β致NPCs退变相关因子的基因表达,减少细胞凋亡;BMSCs可作为种子细胞对椎间盘炎性环境起到“治疗”作用.

关键词：骨髓间充质干细胞、椎间盘退行性变、髓核细胞、凋亡、共培养

所属期刊栏目：25

分类号：Q813;R681.5(生物工程学(生物技术))

资助基金：上海市科委国际合作项目13430721000

在线出版日期：2015-06-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：361-366