白纹伊蚊唾液腺重组aegyptin相似蛋白alALP的制备及抗原性分析
目的 克隆、表达白纹伊蚊唾液腺重组aegyptin相似蛋白alALP编码基因并分析其抗原性. 方法 运用生物信息学方法分析alALP与aegyptin氨基酸序列(GenBank登录号为ABF18122.1)的同源性、二级结构和抗原肽段.提取白纹伊蚊唾液腺总RNA,根据alALP的基因编码序列(GenBank登录号为AY826121)设计引物,RT-PCR扩增目的基因,亚克隆至pGEX-6P-1质粒,转化大肠埃希菌(E.coli)BL21,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质印迹(Western blotting)分析重组蛋白表达情况.重组aegyptin相似蛋白(GST-alALP)经还原型谷胱甘肽(Glutathione Sepharose 4B)亲和层析法纯化后,皮下注射免疫BALB/c小鼠,每次免疫剂量60μg,共免疫3次,每次间隔2周,制备小鼠抗GST-alALP血清.分别以小鼠抗GST-alALP血清和白纹伊蚊叮咬后小鼠血清为一抗,Western blotting分析GST-alALP蛋白的抗原性.结果 生物信息学预测结果显示,alALP与aegyptin的氨基酸序列具有65.58％的同源性,二级结构高度相似并具有一段保守的抗原多肽.RT-PCR结果显示,alALP成熟肽基因扩增产物约为762 bp.经双酶切、PCR和测序结果显示,重组质粒pGEX-6p-1-alALP构建成功.SDS-PAGE和Western blotting结果显示,经IPTG诱导获得相对分子质量(Mr)约56 000的可溶性重组融合蛋白.Western blotting结果显示,GST-alALP蛋白能被该蛋白免疫的小鼠血清和白纹伊蚊叮咬后的小鼠血清识别. 结论 克隆的alALP成熟肽基因能在原核表达系统中高效表达,且具有抗原性.
白纹伊蚊、aegyptin相似蛋白、原核表达、抗原性
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R384.113(医学寄生虫学)
2014-08-12（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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