特异性锤头状核酶对蓝氏贾第鞭毛虫丙酮酸激酶mRNA的表达抑制

摘要：

目的 应用特异性锤头状核酶技术研究蓝氏贾第鞭毛虫丙酮酸激酶(pyruvate kinase)mRNA的表达抑制.方法 用电击转染的方法将含有针对贾第虫丙酮酸激酶mRNA的核酶pGCV-PKH载体导入蓝氏贾第鞭毛虫滋养体细胞内(A组),同时设单纯电击转染滋养体(B组)和正常培养滋养体(C组)为对照.转染后24、48、72和96 h收集各组虫体,计算滋养体浓度,绘制虫体生长曲线.提取虫体总RNA,分别采用RT-PCR和实时PCR方法检测转染后各组各时间段(24、48、72和96 h)核酶mRNA和丙酮酸激酶mRNA相对含量的变化,用紫外分光光度法检测丙酮酸激酶活性.结果虫体生长曲线显示,转染96 h,A组虫体的生长受到明显抑制.RT-PCR检测结果表明,A组在转染后24 h即可在贾第虫滋养体细胞内检测到核酶RNA,其水平可持续至转染后96 h.A组在电击转染后24和48 h,丙酮酸激酶mRNA的表达量分别下降至C组的5%(5.00±0.17)和8%(8.00±0.19),相应的酶活性下降至C组的32%(32.00±0.64)和38%(38.00±0.65).结论 特异性锤头状核酶显著抑制了蓝氏贾第鞭毛虫丙酮酸激酶mRNA的表达.

关键词：蓝氏贾第鞭毛虫、丙酮酸激酶、锤头状核酶

所属期刊栏目：28

分类号：R382.213(医学寄生虫学)

资助基金：国家自然科学基金30670224

在线出版日期：2010-11-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：257-260