微滴式数字PCR定量检测滑液囊支原体方法的建立及应用

摘要：

为绝对定量滑液囊支原体(Mycoplasma synoviae,MS),试验根据已发表的MS VlhA基因序列,针对其保守区域分别设计了 1对特异引物和1条探针,建立了 ddPCR定量检测MS的方法,并检测该方法的特异性、敏感性和重复性.结果显示:建立的方法最佳引物浓度为20pmol/μL,最佳探针浓度为10μmol/μL,最佳退火温度为54℃;该方法仅检测出MS毒株,不能检测出其他禽源病原,MS重组质粒标准品最低检测限为3.5拷贝/μL,3个连续稀释的MS重组质粒DNA检测的变异系数均小于5％;45份病鸡喉拭子、肺脏及关节囊样品检测结果显示,该方法的MS阳性检出率(11.1％)高于荧光定量PCR(8.9％).结果表明,建立的ddPCR方法定量检测MS特异性强、敏感性高、重复性好,为绝对定量MS提供了适合的技术手段.

关键词：微滴式数字PCR、定量检测、鸡滑液囊支原体

所属期刊栏目：45

分类号：S852.62(动物医学（兽医学）)

资助基金：广西重点研发计划;国家高层次人才特殊支持计划（国家“万人计划”）;广西八桂学者专项

在线出版日期：2023-04-03（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：39-45