鸭圆环病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立及初步应用

摘要：

为实现对鸭圆环病毒(DuCV)的快速检测,分析比对GenBank中登录的DuCV全基因组序列,在其保守区设计并合成一对特异性引物,将扩增的212 bp片段克隆入pMD-18T载体中,获得pMD18DuCV重组质粒,通过SYBR Green Ⅰ荧光掺入法分别对系列稀释pMD18DuCV中DuCV特异性片段进行扩增,通过pMD18DuCV浓度对数与Ct值制作了标准曲线并推导出直线回归方程,二者相关系数(R2)为0.9968,建立了DuCV实时荧光定量PCR检测方法,重复性和灵敏性检测结果表明重复性良好,检测下限为67.2拷贝/μL;将建立的DuCV实时荧光定量PCR检测方法分别对鸭肝炎病毒(DHV)、大肠杆菌、新城疫病毒(NDV)、H9亚型禽流感病毒、小鹅瘟病毒(GPV)核酸或cDNA进行特异性检测,结果表明特异性良好.初步应用结果表明,建立的DuCV实时荧光定量PCR方法检出率为26.4％ (62/235),明显优于常规PCR检测结果15.3％ (36/235).

关键词：鸭圆环病毒、实时荧光定量PCR、SYBR Green Ⅰ

所属期刊栏目：39

分类号：S855.3(动物医学（兽医学）)

资助基金：广东省高等学校高层次人才项目

在线出版日期：2017-05-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：15-19