CRISPR/Cas9介导CPED1基因敲除载体活性的验证

摘要：

试验旨在利用CRISPR/Cas9技术分别在鸡成纤维细胞DF-1和鸡胚胎干细胞(Embryomic stem cell,ESCs)上介导CPED1基因敲除,以期为后续研究CPED1基因功能提供技术依据.克隆CPED1基因全长;构建cas9/gRNA载体并转染DF-1和ESCs,经流式分选阳性细胞,采用T7E1酶切法选择活性最佳的敲除载体并分析其敲除效率;同时,对DF-1中的脱靶效率进行检测.结果成功克隆鸡CPED1基因,并构建3个cas9/gRNA载体;T7E1酶切结果表明cas9/gRNA1载体在DF-1阳性细胞中的敲除活性(37％)最佳,该载体也可定点敲除ESCs中的CPED1基因,敲除活性为25％,且在DF-1细胞中未发生脱靶.表明CRISPR/Cas9可有效介导鸡CPED1基因在DF-1和ESCs上敲除.

关键词：CRISPR/Cas9技术、CPED1基因、鸡、敲除载体

所属期刊栏目：39

分类号：S831.2(家禽)

资助基金：国家自然科学基金31472087

在线出版日期：2017-05-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：11-14