表达堆型艾美耳球虫3-1E蛋白的三种重组乳酸乳球菌构建与鉴定

摘要：

为探索堆型艾美耳球虫(Eimeria acervulina)表面抗原3-1E基因在乳酸乳球菌L.lactis NZ9000中的不同表达形式,首先通过PCR扩增3-1E目的基因片段,克隆入pTX8048载体中,构建胞内表达质粒pTX8048-3-1E;将乳球菌未知分泌蛋白(Usp45)信号肽(SP)与3-1E基因片段融合(SP-△3-1E),并克隆入pTX8048中,构建分泌表达质粒pTX8048-SP-△3-1E;将化脓性链球菌M6蛋白细胞壁锚定序列(Cell wall anchor,CWA)克隆入pTX8048-SP-△3-1E中的△3-1E下游(去除△3-1E终止密码子,即NA△3-1E),构建表面表达质粒pTX8048-SP-NA△3-1E-CWA;将三种表达载体电转化到乳酸乳球菌L.lactis NZ9000中,构建三种乳酸乳球菌L.lactis NZ9000/pTX8048-3-1E(胞内表达菌)、L lactis NZ9000/pTX8048-SP-△3-1E(分泌表达菌)及L.lactisNZ9000/pTX8048-SP-NA△3-1E-CWA(表面表达),通过Western blot来检测3-1E目的蛋白在三种阳性乳酸乳球菌中的表达.结果表明,构建的三种重组乳酸乳球菌均可表达目的蛋白.研究结果为进一步评估重组乳酸乳球菌的抗球虫免疫保护作用及后续非抗性标记乳酸菌体系建立奠定基础.

关键词：乳酸乳球菌、胞内表达、分泌表达、表面表达

所属期刊栏目：38

分类号：S852(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家自然科学基金;黑龙江省自然科学基金;黑龙江省博士后启动基金

在线出版日期：2017-01-07（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：14-18