siRNA 沉默 ERK5基因对 MC3 T3-E1成骨细胞增殖及BMP2／BMP7的影响

摘要：

目的：观察ERK5信号通路对MC3T3-E1成骨细胞的增殖，及功能分化蛋白BMP2/BMP7的影响。方法应用小RNA分子干扰技术（ siRNA）沉默ERK5基因，分别将浓度为20、40、60、80 nmol/L的ERK5 siRNA干预MC3T3-E1成骨细胞，筛选ERK5 siRNA转染的最佳浓度。噻唑蓝实验（ MTT）检测转染后12 h、24 h、36 h和48 h细胞的增殖情况，实时荧光定量PCR检测ERK5、BMP2和BMP7 mRNA的表达。 Westernblot 检测不同干预组BMP2及 BMP7蛋白的表达变化。结果当 ERK5 siRNA浓度为60 nmol/L时，MC3T3-E1成骨细胞的ERK5 mRNA的表达下降最为显著，沉默率为76．8±2．2％（P＜0．01）。ERK5 siRNA转染后12 h、24 h、36 h，成骨细胞的增殖受到明显抑制（ P＜0．05），但48 h转染组未发现明显变化（ P＞0．05）。ERK5 siRNA转染24 h后，实时荧光定量PCR结果显示：空白组与对照siRNA组成骨细胞的BMP2/BMP7 mRNA变化水平无显著性差异（P＞0．05），但ERK5 siRNA转染组的BMP2/BMP7 mRNA明显降低（P＜0．05）；Westernblot结果显示，空白组与对照siRNA组成骨细胞的BMP2/BMP7蛋白未发现明显变化（ P＞0．05），但转染组成骨细胞的BMP2/BMP7显著降低（ P＜0．05）。结论 ERK5 siRNA对MC3T3-E1成骨细胞的增殖以及骨形态蛋白BMP2和BMP7的表达有明显抑制作用。

关键词：成骨细胞、细胞增殖、骨形态蛋白、小RNA分子干扰、细胞外信号调节激酶5

分类号：R319(医用一般科学)

资助基金：国家自然科学基金81071478；兰州大学第二医院院内课题YJ2010-03；甘肃省卫生行业计划GSWST-2011-07

在线出版日期：2014-11-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：1055-1058