体外条件下TGF-β3、BMP-2和DEX诱导兔滑膜间充质干细胞向软骨细胞谱系分化的研究

摘要：

目的：本实验拟将分离纯化得到的滑膜间充质干细胞( synovial-derived mesenchymal stem cells，SMSCs )在体外培养条件下进行成软骨刺激诱导，并从转录和翻译两个水平寻找进入软骨细胞分化谱系的证据，进而判断转化生长因子β3( transforming growth factor-β3，TGF-β3)、骨形态发生蛋白( bone morphogenetic protein-2，BMP-2)和地塞米松( dexamethasone，DEX )诱导 SMSCs 进入软骨细胞分化谱系。方法贴壁法分离纯化得到 SMSCs，在体外培养条件下用含500 ng / ml BMP-2、10 ng / ml TGF-β3、10-7 M DEX 的高糖 DMEM 培养基进行刺激诱导，并在倒置相差显微镜下观察分化过程中其形态学的变化，以 RT-PCR检测I、II型胶原及软骨特异性Aggrecan ( AGN )的mRNA表达，细胞免疫荧光化学染色的方法检测细胞分化过程中I、II型胶原的表达，碱性甲苯胺蓝细胞化学染色检测软骨特异性GAG的表达，证实SMSCs的诱导成软骨作用。结果 SMSCs在前述诱导条件下，诱导后14天细胞逐渐由小梭形变为多角形、类软骨细胞样形态，RT-PCR可以检测到I、II型胶原及AGN基因的表达，细胞免疫荧光化学染色I、II型胶原、碱性甲苯胺蓝细胞化学染色结果呈阳性。而未经诱导的SMSCs形态基本保持梭形，基因表达和染色呈阴性，两组间差异显著。细胞免疫荧光化学染色分析SMSCs在软骨诱导培养基中诱导后14天表达I、II型胶原；未经诱导的SMSCs不表达I、II型胶原。说明SMSCs在软骨诱导培养基中诱导后14天进入软骨细胞分化谱系，可作为种子细胞在同样的诱导条件下向软骨分化。结论 SMSCs作为新的MSCs家族成员，显示出与BMSCs相似的多向分化潜能，500 ng/ml BMP-2、10 ng/ml TGF-β3、10-7 M DEX的高糖DMEM培养基中培养后14天，SMSCs已进入软骨细胞分化谱系。SMSCs可作为半月板组织工程的种子细胞。

关键词：间质干细胞、软骨细胞、细胞转分化、转化生长因子

分类号：Q23(细胞遗传学)

资助基金：国家自然科学基金青年科学基金项目81000798

在线出版日期：2014-02-22（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：135-141