不同血清型腺相关病毒对小鼠膝关节软骨细胞感染效率的比较研究

摘要：

目的:比较不同血清型腺相关病毒(adeno-associated virus,AAV)对小鼠膝关节软骨细胞的感染效率,寻找理想的膝关节软骨细胞基因编辑工具.方法:选取4周龄C57BL/6雄鼠45只,体重(14.3±0.2)g,根据右侧膝关节腔注射试剂(6μl)的不同分为以下9组,每组5只.对照组(生理盐水),维2组(维真生物AAV2,滴度为1×1013 vg/ml),维5组(维真生物AAV5,滴度为1×1013 vg/ml),维6组(维真生物AAV6,滴度为1×1013 vg/ml),维7组(维真生物AAV7,滴度为1×1013 vg/ml),维8组(维真生物AAV8,滴度为1×1013 vg/ml),维9组(维真生物AAV9,滴度为1×1013 vg/ml),汉DJ组(汉恒生物AAV2-DJ,滴度为1×1012 vg/ml),汉5组(汉恒生物AAV5,滴度为1×1012 vg/ml).所有病毒过表达绿色荧光蛋白(GFP).在注射30 d后取膝关节,于体视显微镜下大体观察软骨损伤情况后,做10μm冰冻切片,采用荧光显微镜观察膝关节软骨和半月板绿色荧光分布情况.结果:体视显微镜观察结果表明,本研究采取的膝关节腔注射方法对小鼠软骨无明显损伤.组织切片的荧光观察显示,经不同血清型AAV注射后的小鼠膝关节软骨细胞均发出较强的绿色荧光,荧光强度分析中以维2组和维7组软骨和半月板的荧光强度最高,平均光密度值分别为0.077±0.020和0.061±0.022,上述2组与其他各组间比较差异有统计学意义.结论:通过在体膝关节腔注射AAV可成功感染小鼠膝关节软骨细胞,AAV2和AAV7对膝关节软骨组织感染效率高且特异性较强,该方法可作为膝关节软骨细胞基因编辑的有效工具.

关键词：腺病毒、血清、膝关节、软骨细胞、感染

所属期刊栏目：32

分类号：R681.3(骨科学（运动系疾病、矫形外科学）)

资助基金：国家自然科学基金项目81804121,81573994,81273770;国家博士后基金面上项目2018M632154;浙江省自然科学基金LY19H270006,LQ17H270005,LY15H270012;浙江省中医药卫生科技计划项目2017ZB026;浙江省大学生科技创新活动计划新苗人才计划项目2018R410030;浙江省医学会临床科研基金项目2017ZYC-A23

在线出版日期：2019-10-10（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：750-755