靶向PCSK9基因shRNA慢病毒载体的构建及其对PCSK9基因表达的沉默

摘要：

目的 设计以PCSK9基因为靶点的短发夹状RNA(shRNA),构建重组慢病毒载体并鉴定此RNA干扰体系对PCSK9基因表达的影响.方法 将3条人PCSK9基因的shRNA片段插入至慢病毒载体pLentilox3.7,与pCDNA3-hPCSK9-FLAG质粒用Lipofectamine2000共转染293细胞,Westem blotting法鉴定出最有效的shRNA.此重组质粒与pCre-VSV-G、pLoxp-CMV-R8.91经293细胞包装后,产生的重组慢病毒感染293细胞,48h后转染pCDNA3-hPCSK9-FLAG质粒,Western blotting法检测人PCSK9基因表达的情况.结果 经双酶切鉴定,构建了PCSIO shRNA慢病毒载体pLentilox-hPC-SK9,鉴定出hshRNA-2为最有效的shRNA.重组的慢病毒能明显的抑制人PCSK9的表达.结论 慢病毒介导的shRNA干扰技术可特异性的阻断PCSK9的表达,为进一步探讨PCSK9特异性的shRNA治疗脂代谢异常疾病奠定了基础.

关键词：小发夹状RNA、PCSK9、慢病毒、干扰

所属期刊栏目：9

分类号：S94;S85

资助基金：江苏省重点人才项目RC2007057;江苏省现代病原生物学重点实验室开放课题08byrkf01;南京医科大学科技发展基金重点项目NMUZ009

在线出版日期：2010-01-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：257-261