T7-shRNAs对SKOV3卵巢癌细胞株中C-erbB2基因的RNAi作用

摘要：

目的:探讨设计含有T7-启动子的Oligo-DNA,继而合成T7发夹RNA,并应用T7-shRNAs对卵巢癌SKOV3细胞株的卵巢癌C-erbB2基因进行RNAi.方法:自行设计并应用体外转录法合成、筛选出3条T7-shRNAs,脂质体转染卵巢癌SKOV3细胞株,分为非转染组、无关RNA组、shRNA(a、b、c)组,免疫细胞、RT-PCR及CCK-8观测干涉结果.结果:体外转录结果,合成后电泳检测shRNA(a、b、c)纯度较高,符合实验标准;转染后免疫细胞爬片结果,非转染组、无关RNA组和shRNA c链24、48、72 h可见细胞生长正常,与时相无关,着色为深棕色,无抑制效果;shRNA a链24 h可见有一定抑制效果,但48 h即开始恢复生长,72 h已恢复正常;shRNA b链24、48、72 h可见有明显抑制效果,以24～48 h最为明显,至72 h仍维持相当抑制率;在核酸水平上半定量的RT-PCR结果与上述结果相符合;CCK-8动态观测,经shRNA干涉后不同时间内的抑制曲线显示,shRNA b链的抑制作用最明显,而shRNA a链和shRNA c链的抑制作用不明显(P＜0.01),但shRNA a链抑制作用强于shRNA c链(P＜0.01),从整个时间段来看,shRNA b在48 h的抑制作用最强.结论:研究证实应用发夹RNA对肿瘤细胞可以取得明显干涉效果,发现shRNAb对C-erbB2基因干涉具有明显抑制作用,进一步完善RNA干涉实验来抑制肿瘤细胞生长是存在可能的.

关键词：卵巢癌、C-erbB2、SKOV3、RNA干涉

所属期刊栏目：22

分类号：R737.31(肿瘤学)

在线出版日期：2007-07-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：2561-2564