Rap2a真核表达质粒的鉴定及其对肺癌细胞迁移能力的影响

摘要：

背景与目的小G蛋白家族成员Rap2a可调控内皮素和细胞粘附从而影响细胞运动及细胞与基质间相互作用，但其在肿瘤发生发展中的作用仍属未知。克隆人Ras家族小G蛋白Rap2a的cDNA，构建其真核表达质粒并在肺癌细胞表达，初步探讨Rap2a在肺癌发生发展中的作用。方法 Western blot检测Rap2a在肺癌细胞中的内源性表达。人骨肉瘤细胞株U2OS提取细胞总RNA，经逆转录聚合酶链式反应逆转录成cDNA，PCR扩增Rap2a基因，酶切后插入pcDNA3.1(+)构建真核表达质粒pcDNA3.1(+)-Rap2a，采用酶切及测序鉴定。重组质粒转染H1299和A549细胞，Western blot检测目的基因表达。Transwell小室迁移实验观察Rap2a对肺癌细胞迁移能力的影响。明胶酶谱实验检测Rap2a对细胞分泌基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinase, MMP）2的影响。结果与正常细胞相比，肺癌细胞中Rap2a基础表达水平明显增高。双酶切及测序结果显示重组质粒pcDNA3.1(+)-Rap2a成功构建，Werstern blot检测到H1299和A549细胞有相应蛋白表达。迁移实验结果显示转染Rap2a基因后肿瘤细胞迁移能力明显增加。明胶酶谱实验结果显示Rap2a过表达后肺癌细胞分泌MMP2的量随之增加。结论人Rap2a真核表达质粒成功构建，Rap2a基因在肺癌细胞株成功表达并能促进肺癌细胞的迁移能力。

关键词：Rap2a、基因克隆、迁移、A549、H1299

分类号：R73;TP3

资助基金：国家自然科学基金资助项目81372172;教育部重点课题项目No.212062资助This study was supported by grants from the National Natural Science Foundation of China to Dongsheng PEI81372172;Key Project of the Education Department of China to Dongsheng PEI212062

在线出版日期：2014-10-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：643-648