应用Ca2+荧光探针fluo-3和fluo-4测定H2O2诱导的A549细胞凋亡过程中的[Ca2+]i变化

摘要：

背景与目的肺癌是世界范围内常见的恶性肿瘤，Ca2+对于肿瘤细胞凋亡有重要的调控作用。实时监测肺癌细胞内Ca2+水平，有助于深入研究Ca2+介导肺癌细胞凋亡的分子机制。本研究旨在观察Ca2+荧光探针fluo-3和fluo-4在H2O2诱导的A549细胞凋亡过程中的应用，实时测定胞浆Ca2+浓度（[Ca2+]i），探讨[Ca2+]i与细胞凋亡的关系，并比较两种Ca2+探针在荧光强度及[Ca2+]i测定值方面的差异。方法采用Ca2+荧光探针fluo-3和fluo-4负载细胞，1 h后用不同浓度的H2O2刺激细胞，激光扫描共聚焦显微镜实时测定选取细胞的[Ca2+]i变化。采用DAPI染色试剂盒观察H2O2刺激后细胞凋亡情况。结果在相同的探针浓度、负载时间和相同的图像采集参数的条件下，选定细胞内fluo-4平均荧光强度高于fluo-3。50 mM H2O2刺激后，A549细胞胞浆内[Ca2+]i迅速升高，通过公式计算发现采用fluo-3探针负载的选定细胞中[Ca2+]i变化范围是112.2 nM-1,069.6 nM，采用lfuo-4探针负载的选定细胞中[Ca2+]i变化范围是7.6 nM-505.4 nM。同时发现经H2O2刺激后，凋亡细胞百分比明显增加（P<0.01）。结论H2O2促进A549细胞内Ca2+释放，诱导细胞凋亡。Ca2+探针lfuo-4可能更适合于监测含量较低的细胞中[Ca2+]i变化。

关键词：Fluo-3、Fluo-4、Ca2+、H2O2、细胞凋亡

分类号：R73;TP2

资助基金：国家自然科学基金项目81101599;沈阳市科学技术项目F11-241-00, F12-264-4-01;辽宁省科学事业研究公益基金项目2012006005

在线出版日期：2014-04-03（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：197-202