RNAi非特异效应的干扰素反应探讨

摘要：

背景与目的 RNA干扰(RNA interference,RNAi)是一项针对转录后特异序列基因沉默的技术,可用于调控基因表达和研究基因功能.但该技术引发的非特异效应也越来越受到重视.其中,干扰素反应为RNAi非特异效应的主要类型之一.本文拟探讨在RNA干扰实验中干扰素反应的检测.方法 在A549人肺癌细胞株中应用基因转染技术研究5个不同的FLJ20420 siRNA对FLJ20420基因沉默情况;应用real-time PCR和基因芯片技术相结合,分别检测经2个不同FLJ20420-siRNA干扰后A549细胞中干扰素激活基因(ISGs)表达谱的变化情况.结果 ①在A549细胞中,5个不同的FLJ20420-siRNA可不同程度地埘目的基因起到沉默作用,其中FLJ20420-siRNA-1和FLJ20420-siRNA-4两个的沉默效果最佳,分别为80%和90%;②应用real-time PCR检测与干扰素反应激活相关的16个主要标志性基因发现,A549-FLJ-siRNA-1细胞中有14个基因的表达明显上调;而A549-FLJ-siRNA-4细胞中仅有2个基因的表达变化差异具有显著性,提示在A549-FLJ-siRNA-1细胞中发生了RNAi的非特异性效应;③基因芯片分析发现在A549-FLJ-siRNA-1细胞中有51个干扰素激活基因(ISGs)表达上调2倍以上(P<0.05),而在A549-FLJ-siRNA-4细胞中仅有6个干扰素激活基因(ISGs)表达上调2倍以上(P<0.05),从而证实了A549-FLJ-siRNA-1细胞中存在RNAi的非特异性效应干扰素反应.结论 在进行RNAi实验时,siRNA不仅能针对目的基因产生沉默效果,也可同时诱发干扰素反应.应用real-time PCR对于主要的干扰素激活基因(ISGs)的mRNA表达变化的检测将有助于发现RNAi非特异效应干扰素反应.

关键词：RNAi、FLJ20420、干扰素反应、干扰素激活基因

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分类号：R734.2(肿瘤学)

资助基金：国家自然科学基金项目30500221,30500496;国家"十一五"科技攻关项目2006BAI02A01

在线出版日期：2013-04-22（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：16-22