人miR-146b慢病毒载体构建及人脂肪细胞中表达验证

摘要：

目的 构建人miR 146b慢病毒表达载体,包被病毒并检测其在人脂肪细胞中过表达效果.方法 以人基因组DNA为模板,PCR高保真扩增包含miR-146b区域上下游各100bp左右的基因组DNA,亚克隆入慢病毒表达载体,与包装质粒共转染HEK-293T细胞,包装病毒,收取病毒上清,纯化后感染人脂肪前体细胞,36 h开始观察荧光标记,72 h收取细胞,抽提RNA,Realtime PCR检测慢病毒感染下miR-146b的相应表达量.结果 成功构建人miR-146b慢病毒表达载体,包装获得的病毒感染人脂肪细胞的效率可达到85％以上,miR-146b过表达水平可接近4倍.结论 本研究成功构建了人miR-146b慢病毒表达载体,包被的慢病毒可以在人脂肪细胞中实现过表达效果,为后续功能研究奠定了基础.

关键词：miR-146b、慢病毒、人脂肪前体细胞

所属期刊栏目：21

分类号：R394

资助基金：国家自然科学基金81100619;江苏省医学创新团队项目LJ201108;南京市科技发展计划201104013

在线出版日期：2013-12-03（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：1155-1157,1160