布鲁氏菌S2疫苗株实时荧光定量PCR检测体系的建立及应用

摘要：

目的:建立一种布鲁氏菌S2疫苗株的实时荧光定量PCR检测体系。方法:依据布鲁氏菌S2疫苗株与其他布鲁氏菌参考菌株全基因组序列的差异，设计引物和探针，建立实时荧光定量PCR检测体系。自中国疾病预防控制中心传染病预防控制所，收集22株布鲁氏菌参考菌株及8种非布鲁氏菌对照菌株的DNA；同时自布病疫苗生产厂采集环境样本，使用血液/组织基因组DNA提取试剂盒提取环境样本细菌DNA。对获取的DNA先行普通PCR预扩增，再以扩增的PCR产物为模板进行实时荧光定量PCR二次扩增（巢式荧光定量PCR），观察是否出现特异荧光曲线及相应的循环数（Ct值），并测试其灵敏性。结果:建立的实时荧光定量PCR检测体系，除S2疫苗株外，其他21株布鲁氏菌参考菌株和8种非布鲁氏菌对照菌株均未检出特异荧光曲线（无Ct值）。建立的检测体系，检测布鲁氏菌S2疫苗株DNA的最低限为4.34 fg；采集的14份环境样本，其中3份检测到布鲁氏菌S2疫苗株DNA。结论:建立的实时荧光定量PCR检测体系，能够检测到样本中布鲁氏菌S2疫苗株，具有较好的灵敏性和特异性。

关键词：布鲁氏菌、S2疫苗株、实时荧光定量PCR

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资助基金：国家重点研发计划项目2021YFC2600501;国家重点研发计划项目2017YFC1602004;Supported by National Key Research and Development Program of China2021YFC2600501;National Key Research and Development Program of China2017YFC1602004

在线出版日期：2023-05-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：328-331