田鼠巴贝虫抗原组分免疫鉴定与质谱分析

摘要：

目的 分析田鼠巴贝虫可溶性抗原蛋白组分,寻找敏感、特异的诊断候选抗原.方法 用田鼠巴贝虫感染BALB/c小鼠,待红细胞感染率达到高峰时(感染率＞70％),收集虫体,制备可溶性抗原;同时收集BALB/c小鼠的本底血清和感染田鼠巴贝虫7、14、21、28、35、42、49和56 d后的血清;聚丙烯酰胺凝胶电泳法(SDS-PAGE)分析可溶性抗原的蛋白组分,蛋白质免疫印迹法(Western blot)分析可溶性抗原的免疫反应性,选择阳性反应条带进行质谱鉴定和序列分析.结果 可溶性抗原经SDS-PAGE分析,可观察到9条主带和12条次带,蛋白条带的相对分子质量(Mr)介于(12～185)×103(kDa);Western blot结果显示感染后7d的混合鼠血清可识别Mr为40和45 kDa的蛋白条带且反应较强,感染后14d的混合鼠血清可识别Mr为40、45、54和95 kDa的蛋白条带,感染后21 d的混合鼠血清可识别Mr为27、40、45、54、95和110 kDa的蛋白条带,感染后28 d至感染56 d的混合鼠血清均可识别Mr为27、40、45、54、95和110 kDa的蛋白条带且随着感染时间的延长出现其他的弱反应条带.阳性反应条带通过质谱鉴定和序列分析,共确定336个蛋白,包括表面抗原、热休克蛋白70、血清反应抗原、含t-复合物多肽伴侣蛋白的Eta亚基1和未命名蛋白.结论 田鼠巴贝虫可溶性抗原中Mr为40、45、54 kDa的组分是较好的诊断候选抗原,在田鼠巴贝虫病诊断中的应用前景值得进一步研究.

关键词：田鼠巴贝虫、可溶性抗原、蛋白质免疫印迹法、质谱

所属期刊栏目：35

资助基金：卫生行业科研专项201202019;国家科技重大专项2012ZX10004-220;第四轮三年行动计划项目2015-2017,GWIV-29;国家人口与健康科学数据共享平台寄生虫病和热带病种质资源中心2015Supported by Special Fund for Health Research in the Public Interest201202019;the National S & T Major Program2012ZX10004-220;the Fourth Round of Three-Year Public Health Action Plan2015-2017,GWIV-29;Parasitic and Tropical Diseases Species Resources Center of National Scientific Data Sharing Platform for Population and Health2015

在线出版日期：2016-09-22（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：561-566