神经型尼古丁受体α3亚单位及丝裂原活化蛋白激酶信号通路在氟暴露神经母细胞瘤细胞系SH-SY5Y中的表达

摘要：

目的 观察神经型尼古丁受体α3亚单位(α3nAChR)及丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路中细胞外调节蛋白激酶(ERK1/2)、c-Jun氨基末端激酶(JNK)、p38激酶在氟暴露神经母细胞瘤细胞系SH-SY5Y中的表达,探讨过量氟暴露对细胞形成损害的信号传递机制.方法 以α3nAChR基因沉默的SH-SY5Y细胞作为α3nAChR沉默组,以正常SH-SY5Y细胞作为对照组,采用蛋白印迹法和实时荧光定量PCR法检测α3nAChR基因沉默效果.分别用0.000、0.005、0.050、0.500、1.000、2.500、5.000 mmol/L氟化钠(NaF)处理正常SH-SY5Y细胞,用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞存活率,筛选染氟安全浓度.根据染氟安全浓度筛选结果,选择4.000 mmol/L NaF处理α3nAChR沉默组和对照组SH-SY5Y细胞0、4、8、12、24、36、48 h,用蛋白印迹法检测细胞中ERK1/2、JNK、p38蛋白表达.结果 基因沉默效果检测结果显示,在α3nAChR沉默组,α3nAChRmRNA(0.04±0.03)和蛋白(12.0±2.5)表达明显低于对照组(1.00±0.11、100.0±11.3,t=24.58、28.80,P均＜ 0.05).筛选染氟安全浓度结果显示,在染氟5.000 mmol/L组,SH-SY5Y细胞存活率(0.53±0.15)明显低于0.000 mmol/L组(1.05±0.05,P＜0.05),而其他染氟剂量组未见明显改变(P均＞0.05).随着染氟时间延长,α3nAChR沉默组和对照组磷酸化ERK1/2表达逐渐升高,其中24、36、48 h(188.33±7.33、200.00±10.01、213.33±11.55,125.33±5.69、136.00±4.52、155.33±6.51)与同组0 h(100.00±0.00、100.00±0.00)比较,差异有统计学意义(P均＜ 0.05),且24、36、48 h α3nAChR沉默组明显高于对照组(t=9.26、7.63、5.72,P均＜0.05).随着染氟时间延长,α3nAChR沉默组和对照组磷酸化JNK表达逐渐升高,其中12、24、36、48 h α3nAChR沉默组(154.00±6.25、149.00±5.57、156.00±6.08、141.67±2.52)和8、12、24、36、48 h对照组(133.33±10.69、173.00±4.00、175.00±11.79、200.67±11.93、200.33±18.58)与同组0 h(100.00±0.00、100.00±0.00)比较,差异有统计学意义(P均＜ 0.05),且8、12、24、36、48 h α3nAChR沉默组明显低于对照组(t=-428、-5.02、-2.89、-8.33、-6.18,P均＜0.05).24、36、48 h对照组磷酸化p38激酶表达(120.33±4.51、122.00±7.55、119.67±7.57)明显高于0h(100.00±0.00,P均＜0.05),且高于同时间点α3nAChR沉默组(93.33±9.61、94.00±5.01、98.33±5.69,t=-4.01、-6.73、-5.59,P均＜0.05).两组细胞中总ERK1/2、总JNK、总p38激酶表达随染氟时间延长未见明显改变(P均＞ 0.05).结论 在过量氟暴露条件下,ERK1/2信号通路的激活不完全依赖于α3nAChR的表达;而JNK和p38两条通路的激活在一定程度上依赖于α3nAChR.

关键词：神经型尼古丁受体、丝裂原活化蛋白激酶、人神经母细胞瘤细胞系

所属期刊栏目：34

分类号：R285.5;R392;R737.9

资助基金：国家自然科学基金;国家科技支撑计划;贵州省科技厅-贵阳医学院联合项目;贵州省协同创新中心201406

在线出版日期：2015-09-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：553-558