抑制钙敏感受体表达对血管紧张素Ⅱ诱导大鼠心肌H9c2细胞肥大的影响

摘要：

目的 探讨抑制钙敏感受体(CaSR)表达对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导大鼠心肌H9c2细胞肥大的影响及作用机制.方法 采用细胞培养的方法,用AngⅡ处理H9c2细胞复制心肌肥大细胞模型,并在此基础上,应用CaSR激动剂三氯化钆(GdCl3)、CaSR抑制剂Calhex231或自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)处理细胞.共分为5组:对照组、AngⅡ组、GdCl3+ AngⅡ组、GdCl3+ Calhex231+ AngⅡ组、GdCl3+ 3-MA+ AngⅡ组,每组6例.采用考马斯亮蓝蛋白试剂盒测定总蛋白含量;蛋白印迹法检测心肌肥大信号蛋白Ca2+/钙调蛋白依赖性蛋白激酶(CaMKⅡ)与其磷酸化形式(pCaMKⅡ)表达来评价细胞肥大情况;蛋白印迹法检测CaSR、自噬标志物[Beclin-1、微管相关蛋白轻链(LC3)Ⅱ/LC3Ⅰ、P62]和Ca2+/钙调蛋白依赖性蛋白激酶激酶β(CaMKKβ)-腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)-哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)通路的表达.结果 ①GdCl3能够促进AngⅡ所诱发的CaSR蛋白表达增多(对照组:0.22±0.04; AngⅡ组:0.43±0.02; GdCl3+ AngⅡ组:0.63±0.08,P均＜0.05)、细胞总蛋白含量增多[对照组:(2.52±0.84)g/L;AngⅡ组:(8.72±3.60)g/L;GdCl3+ AngⅡ组:(14.17±4.49)g/L,P均＜0.05]、pCaMKⅡ/CaMKⅡ比值升高(对照组:0.25±0.05; AngⅡ组:0.51±0.03;GdCl3+ AngⅡ组:0.77±0.06,P均＜0.05),而Calhex231则能够抑制GdCl3引起的上述指标的增加[GdCl3+Calhex231+AngⅡ组,CaSR:0.41±0.16;总蛋白含量:(9.92±2.54) g/L;pCaMK Ⅱ/CaMK Ⅱ:0.58±0.08,P均＜0.05].②GdCl3能够促进AngⅡ所诱发的自噬标志物Beclin-1蛋白表达增多(对照组:0.31±0.06; AngⅡ组:0.55±0.09;GdCl3+AngⅡ组:0.74±0.08,P均＜0.05)、LC3 Ⅱ/LC3 Ⅰ比值增加(对照组:0.28±0.06;AngⅡ组:0.56±0.10;GdCl3+AngⅡ组:1.00±0.15,P均＜0.05),P62蛋白表达减少(对照组:0.54±0.03;AngⅡ组:0.34±0.02; GdCl3+ AngⅡ组:0.15±0.03,P均＜0.05);Calhex231则能抑制GdCl3引起的自噬标志物指标的改变(GdCl3+Calhex231+AngⅡ组,Beclin-1:0.53±0.14;LC3Ⅱ/LC3Ⅰ:0.57±0.12;P62:0.28±0.05,P均＜ 0.05).③GdCl3可引起pCaMKKβ/CaMKKβ(对照组:0.43±0.09;AngⅡ组:0.76±0.12;GdCl3+ AngⅡ组:1.19±0.21)和pAMPK/AMPK(对照组:0.38±0.11;AngⅡ组:0.68±0.08;GdCl3+ AngⅡ组:1.18±0.08,P均＜0.05)比值升高,pmTOR/mTOR(对照组:0.90±0.10;AngⅡ组:0.54±0.04;GdCl3+AngⅡ组:0.29±0.09,P均＜ 0.05)比值降低;Calhex231则能抑制GdCl3引起的上述蛋白表达变化(GdCl3+ Calhex231+AngⅡ组,pCaMKKβ/CaMKKβ:0.75±0.06;pAMPK/AMPK:0.57±0.05;pmTOR/mTOR:0.51±0.08,P均＜0.05).结论 抑制CaSR表达可逆转AngⅡ诱导的H9c2细胞肥大,其机制可能与抑制自噬、抑制CaMKKβ-AMPK-mTOR通路有关.

关键词：钙敏感受体、自噬、血管紧张素Ⅱ、大鼠、心肌肥大

所属期刊栏目：34

分类号：R734.2;R542.2;R318

资助基金：国家自然科学基金;黑龙江省自然科学基金

在线出版日期：2015-05-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：265-269