氟中毒对体外培养破骨细胞数量及骨吸收功能的影响

摘要：

目的 观察氟中毒对体外培养破骨细胞数量及骨吸收功能的影响,探讨其作用机制.方法 机械分离法作用于新生SD大鼠四肢长骨,于TC199培养液(含10%胎牛血清)中获得破骨细胞和骨髓基质细胞.将破骨细胞接种于96孔培养板和象牙片培养,而骨髓基质细胞接种于6孔培养板培养,分别于2 h后换液并染氟(氟化钠),对照组、低氟组、中氟组、高氟组染氟剂量分别为0、2.5×10-5、5.0×10-5、10.0×10-5mol/L.培养2、5d后对培养板中破骨细胞进行抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色,光镜下计数破骨细胞数量;培养5 d后象牙片经1%甲苯胺蓝染色,光镜下分析破骨细胞骨吸收陷窝面积.骨髓基质细胞染氟作用8 h后提取总RNA,实时荧光定量PCR法检测细胞核因子κβ受体活化因子配体(RANKL)和骨保护素(0PG)mRNA表达水平.结果 ①体外培养2 d时,对照组、低氟组、中氟组、高氟组破骨细胞数量分别为(337.5 4-70.5)、(447.5 ±43.4)、(472.9±34.8)、(475.3±24-3)个/孔,各染氟组明显高于对照组(P均<0.05);体外培养5 d时,对照组、低氟组、中氟组、高氟组破骨细胞数量分别为(92.5±22.1)、(123.0±26.4)、(135.5 ±22.2)、(136.9 ±23.0)个/孔,各染氟组明显高于对照组(P均<0.05).②体外培养5 d时,对照组、低氟组、中氟组、高氟组破骨细胞骨吸收陷窝面积分别为(0.088±0.030)、(0.100 ±0.018)、(0.152±0.015)、(0.242±0.031)mm2/片,中氟组和高氟组明显高于对照组(P均<0.05).③对照组、低氟组、中氟组、高氟组骨髓基质细胞RANKL/OPG mRNA表达比值分别为100.00±56.02、144.95±97.21、223.25 ±184.48、193.98 ±137.93,中氟组和高氟组明显高于对照组(P均<0.05).结论 氟中毒可引起体外培养破骨细胞数量增多,促进其细胞分化及骨吸收活性,该作用可能与其上调 RANKL/OPC,mRNA表达比值有关.

关键词：氟化物中毒、破骨细胞、细胞培养技术、细胞核因子κβ受体活化因子配体、骨保护素

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分类号：R274.9

资助基金：科技部国际合作重大项目2010DFB30530;贵州省自然科学基金项目黔科合J字[2009]2161号;贵阳市大学生创业基金2008

在线出版日期：2011-07-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：266-269