一个细胞融合实验体系的建立及初步应用

摘要：

目的 建立一个细胞融合实验体系,观察凝血酶(thrombin,Th)对I型人免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus type I,HIV-1)包膜糖蛋白(envelope glycoproteins,Env)介导的细胞融合的影响.方法 采用携带HIV-1 JRFL株env基因的表达质粒pSV-Ⅲ-JRFL-dCT与携带HIV-1 tat基因的表达质粒pcTat共转染293T细胞,检测到细胞膜表面Env表达后,将pSV-Ⅲ-JRFL-dCT与pcTat分别按1∶2、2∶3、1∶1、2∶1、5∶1、10∶1共转染293T细胞,然后再与Magic 5A细胞进行融合实验,计数融合细胞数目并确定最适宜的融合条件,建立稳定的细胞-细胞融合实验体系.在所建立融合体系基础上利用Th处理Env表达细胞,观察对融合作用的影响.结果 pSV-Ⅲ-JRFL-dCT与pcTat按1∶1、2∶1共转染293T细胞,可建立稳定的细胞-细胞融合实验体系.Th能够增强细胞融合,且融合细胞数随着Th浓度增高而逐渐增加.Th处理10 min与处理30 min比较,融合增强作用更加显著.结论 质粒pSV-Ⅲ-JRFL-dCT与pcTat按1∶1、2∶1共转染293T细胞,与Magic5A细胞进行融合实验可得到稳定的细胞-细胞融合实验体系,Th对HIV-1包膜介导的细胞融合有促进作用.

关键词：Ⅰ型人免疫缺陷病毒(HIV-1)、包膜糖蛋白、细胞融合、凝血酶

所属期刊栏目：26

分类号：R1(预防医学、卫生学)

资助基金：国家自然科学基金30471608;教育部科研项目206403;哈尔滨医科大学校科研和教改项目

在线出版日期：2008-03-03（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：695-698