周期型马来丝虫半胱氨酸蛋白酶基因原核和真核表达质粒的构建

摘要：

目的 构建我国流行的周期型马来丝虫半胱氨酸蛋白酶(BmCP)基因原核和真核表达质粒,为进一步研究奠定基础.方法 从周期型马来丝虫虫体中提取总RNA,反转录成cDNA,设计合成引物,以cDNA为模板,通过PCR从cDNA中扩增出目的 基因,扩增产物经初步鉴定后将其克隆入pMD18-T载体,进行双酶切及PCR扩增鉴定,获得阳性重组质粒,进行测序分析和同源性比较.阳性克隆的质粒亚克隆至真核表达质粒pcDNA3.1(+),转化感受态大肠埃希菌(E.coli)DH5α,筛选阳性克隆,用PCR和双酶切鉴定阳性重组子.结果 RT-PCR扩增出1条约1201 bp的特异性条带,重组质粒双酶切和以质粒为模板的PCR结果与预期相符,DNA序列分析与GenBank已知的基因序列同源性为99%.构建了真核重组表达质粒pcDNA3.1-BmCP.结论 成功构建了周期型BmCP原核和真核重组表达质粒,为进一步研究该基因的功能提供了条件.

关键词：马来丝虫、半胱氨酸蛋白酶、基因、质粒、构建

所属期刊栏目：26

分类号：R3(基础医学)

资助基金：江苏省教育厅自然科学基金04KJD310136

在线出版日期：2008-03-03（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：639-642