RFWD3基因重组慢病毒表达载体的构建及RFWD3蛋白在宫颈癌细胞中的功能验证

摘要：

目的 构建E3泛素化连接酶环指与WD重复结构域蛋白(RING finger and WD repeat domain,RFWD3)的慢病毒表达载体,研究RFWD3对宫颈癌细胞增殖与迁移能力的影响.方法 以宫颈癌HeLa细胞的cDNA为模板扩增RFWD3基因片段,利用DNA重组技术,将上述片段克隆至慢病毒载体pCDH-CMV-MCS-EF1-copGFP(简称pCDH)中,构建pCDH-RFWD3重组真核表达质粒.经酶切及测序验证准确后,采用三质粒慢病毒包装系统包装RFWD3病毒,通过梯度稀释法感染人胚肾上皮细胞(293T)检测病毒滴度.随后采用RFWD3慢病毒液感染宫颈癌HeLa细胞,运用Western blot实验检测慢病毒转导后HeLa细胞中RFWD3蛋白的表达水平,进一步通过CCK-8和细胞划痕实验检测过表达RFWD3蛋白对HeLa细胞增殖与迁移能力的影响.结果 可表达RFWD3蛋白的pCDH-RFWD3慢病毒载体获成功构建.包装RFWD3慢病毒,建立稳定表达RFWD3蛋白的宫颈癌HeLa细胞系.RFWD3慢病毒转导后的HeLa细胞与对照细胞相比,其细胞增殖与迁移能力显著增强(P＜0.05).结论 RFWD3能够显著增强宫颈癌HeLa细胞的增殖与迁移能力.

关键词：环指与WD重复结构域蛋白、宫颈癌、HeLa细胞、慢病毒、增殖、迁移

所属期刊栏目：33

分类号：R737.33(肿瘤学)

资助基金：国家自然科学基金青年科学基金81902639

在线出版日期：2020-09-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：1009-1013