microRNA干扰HPV16 E6基因对宫颈癌细胞顺铂敏感性影响的实验研究

摘要：

背景与目的:宫颈癌是常见的妇科恶性肿瘤,其中80%的宫颈癌可以检测到HPV16基因.本研究观察HPV16 E6基因miRNA干扰对宫颈癌CaSki细胞顺铂敏感性的影响.方法:利用分子生物学技术,将本实验室构建的针对HPV16 E6基因的miRNA表达载体pcDNA?6.2-GW/EmGFPmiR,分别转染至CaSki细胞和C-33A细胞内.倒置荧光显微镜观察转染效率,RT-PCR测定HPV16 E6 mRNA变化,蛋白质印迹法(Western blot)检测转染前后E6蛋白表达,MTT法检测转染前后对宫颈癌细胞顺铂敏感性的影响.结果:经杀稻瘟菌素(blasticidin S HCl)选择培养液筛选2周后,将获得的稳定转染细胞分别命名为CaSki-M3和CaSki-N、C-33A-M3和C-33A-N.RT-PCR显示,CaSki-M3细胞内的E6 mRNA转录水平比未转染组降低了99%,E6蛋白的表达抑制率为87.5%.用0.005、0.05、0.5、5、50和500μg/mL的顺铂处理未转染CaSki和C-33A以及转染后CaSki-M3、CaSki-N、C-33A-M3和C-33A-N细胞,CaSki-M3细胞对顺铂的敏感性显著升高(P<0.01).结论:HPV16 E6 miRNA有效下调HPV16 E6 mRNA水平,抑制HPV16 E6蛋白的表达,可明显提高CaSki细胞对顺铂的敏感程度.

关键词：HPV16 E6、microRNA、宫颈癌细胞、顺铂

分类号：R737.33(肿瘤学)

在线出版日期：2013-03-07（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：892-897