靶向EGFR基因的短发夹RNA对A549细胞生长及药物敏感性的影响

摘要：

背景与目的:已证实非小细胞肺癌中表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)的过度表达和活化与肿瘤分期、放化疗敏感度下降密切相关.许多阻滞和下调EGFR的方法被用来抑制肿瘤增殖以改善预后,EGFR目前成为公认的肿瘤基因治疗的重要靶点.本研究采用靶向EGFR的短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)表达重组质粒,观察能否在人肺腺癌细胞株A549细胞中引发RNA干扰(RNAi)效应及其对A549细胞生长及药物敏感性的影响.方法:构建靶向EGFR的shRNA重组质粒(pShEGFR)和非特异性的shRNA重组质粒(pShNEG),阳离子脂质体将其转染至肺腺癌A549细胞分别命名为A549/pShEGFR、A549/pShNEG和对照组A549,免疫荧光和Western blot法检测转染后细胞中EGFR表达变化;克隆形成实验观察细胞生长变化;流式细胞仪检测细胞周期和凋亡;MTT法检测细胞对顺铂、多柔比星、紫杉醇的敏感性.结果:与对照组A549细胞和A549/pShNEG相比,A549/pShEGFR可显著抑制A549细胞中EGFR表达,转染后第6天抑制率达74.1%(P＜0.01);A549/pShEGFR组细胞克隆形成抑制率为62.8%.与对照组A549细胞和A549/pShNEG相比,A549/pShEGFR组细胞阻滞在G0/G1期(63.2±1.1,64.5±1.4 vs.74.2±0.8;P＜0.01),凋亡细胞比例显著增加(5.8±1.4,7.7±1.2 vs.25.6±1.2;P＜0.01);与A549组相比,A549/pShEGFR可将A549细胞对顺铂、多柔比星、紫杉醇的敏感性分别提高6.7、5.5、6.6倍.结论:瞬时转染靶向EGFR基因的shRNA表达重组质粒能够通过下调EGFR蛋白水平抑制肺腺癌A549细胞生长,并提高细胞对不同化疗药物的敏感性.

关键词：表皮生长因子、肺肿瘤、敏感性、DDP、多柔比星、紫杉醇、培养的肿瘤细胞

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分类号：R734.2(肿瘤学)

资助基金：中国博士后科学基金2005037488;上海市科委资助项目04DZ19208

在线出版日期：2008-03-10（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：833-837