三元复合因子Net嵌合型重组腺病毒载体的构建及鉴定

摘要：

目的:克隆人三元复合因子Net全长基因,构建其重组腺病毒载体.方法:抽提正常人胰腺组织中总RNA,经RT-PCR扩增出全长Net基因,利用同源重组的方法将腺病毒骨架质粒pBHG35和穿梭质粒pDC316- Net共转染293细胞,获得腺病毒重组质粒Ad5/F35-Net,在293细胞中包装和扩增后,获得高滴度的腺病毒重组质粒Ad5/F35-Net.采用PCR和蛋白印迹法检测Net基因的表达.结果:用RT-PCR方法,从人胰腺癌组织中扩增出1224bp的cDNA片段,经测序证实为人Net基因.最终构建及包装出高滴度的重组腺病毒载体Ad5/F35-Net.结论:成功克隆了人Net全长基因,并构建其重组腺病毒表达载体,为进一步研究人Net基因在相关肿瘤疾病中的生物学作用奠定了基础.

关键词：腺病毒载体、Net基因、克隆、293细胞

所属期刊栏目：11

分类号：R446(诊断学)

资助基金：上海市自然科学基金项目11ZR1429000

在线出版日期：2012-09-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：295-298