流式细胞仪分选大鼠胰岛β细胞方法的建立及应用

摘要：

目的:应用流式细胞仪(FCM)结合侧向角散射光(ssC)和细胞自发荧光强度分选大鼠胰岛β细胞.方法:选取正常雄性SD大鼠,胶原酶消化显微镜下手捡纯化胰岛.胰岛以胰蛋白酶和DNA酶消化成单细胞悬液.依据细胞自发荧光强度和SSC的差异通过流式细胞仪进行细胞分选.细胞存活率用PI/HO双染法鉴定,β细胞的纯度用细胞免疫组化鉴定.胰岛素测定采用酶联免疫吸附法.结果:自发荧光强度和SSC均高的细胞群中胰岛素染色阳性的细胞百分比为(94.5±0.95)％,较分选前单细胞中胰岛素染色阳性细胞百分比(81.2±1.12)％增高,为β细胞富集群；自发荧光强度和SSC均较低的细胞群中胰岛素染色阳性的细胞百分比为(10.0±0.82)％,为non-β细胞群.分选出的β细胞群死亡率低(＜5％),其胰岛素分泌随葡萄糖刺激浓度的增加而增加(r=0.8,P＜0.001),其中葡萄糖浓度在20 mmol/L时β细胞分泌的胰岛素明显大于浓度为2.8 mmol/L时的分泌量(P＜0.001).此外,Forskolin (FK)和Exendin-4 (EX4)可以显著增强β细胞胰岛素的分泌(PFK＜0.001,PEX4＜0.05).结论:根据β细胞自发荧光和SSC与non -β细胞的差异进行纯化的β细胞死亡率低、纯度高,胰岛素分泌功能较好,是一种值得推广的分选β细胞的方法.

关键词：胰岛β细胞、流式细胞仪、纯化β细胞、评估

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分类号：R335+.9(人体生理学)

资助基金：国家自然科学基金30971121;上海市科委科技创新课题11140900900

在线出版日期：2012-09-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：263-268