DRAM基因真核表达载体的构建及其表达对HepG2细胞的作用

摘要：

目的:构建DRAM全长cDNA的真核表达载体pEGFP-DRAM,观察DRAM在人肝细胞HepG2中的作用.方法:应用RT-PCR技术扩增获得DRAM全长cNDA,克隆扩增产物,经酶切、DNA测序鉴定正确后,构成pEGFP-DRAM的真核表达重组质粒.用脂质体将重组质粒转染入HepG2细胞,在激光共聚焦显微镜(LSCM)下观察DRAM的表达情况,用流式细胞仪检测细胞凋亡、细胞周期和死亡细胞,MTS法检测细胞增殖能力,Western blot鉴定细胞表达蛋白质的水平,并在透射电子显微镜下观察自噬体.结果:构建完成的真核表达重组质粒pEGFP-DRAM,经DNA测序证实与GenBank中的人DRAM cDNA序列一致.LSCM下可观察到转染DRAM的细胞中有绿色荧光蛋白的表达.流式细胞分析仪检测显示,转染DRAM的HepG2死亡细胞明显增高(P<0.05);G1期细胞百分数则明显减少(P<0.05);MTS法检测结果显示转染DRAM的HepG2细胞增殖力明显增高(P<0.05);Westem blot检测到DRAM蛋白表达明显增高;转染pEGFP-N1的HepG2细胞超微结构基本正常,转染DRAg的一些细胞中可见自噬体.结论:本研究成功构建了表达DRAM的真核质粒,并在HepG2细胞中表达,DRAM在肿瘤细胞存在双向效应,既可诱导HepG2细胞发生自噬性死亡,又可促进HepG2细胞增殖.

关键词：损伤调节自噬调质、DRAM、自噬、细胞凋亡、载体

所属期刊栏目：8

分类号：Q52;Q78(核酸)

在线出版日期：2009-06-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：165-170