基于LncRNA MIAT/miR-384-5p研究九龙藤黄酮抑制自噬抗心肌缺氧损伤的作用机制

摘要：

目的 基于长链非编码RNA(long non coding RNA,LncRNA)心肌梗死相关转录本(myocardial infarction associated transcript,MIAT)/miR-384-5p探讨九龙藤黄酮(Bauhinia championii flavones,BCF)抑制自噬抗心肌缺氧损伤的作用及机制.方法 培养H9c2心肌细胞及敲低LncRNA MIAT稳转株,建立心肌细胞氧糖剥夺(oxygen-glucose deprivation,OGD)模型模拟心肌缺血缺氧,给予BCF预处理;选取SD雄性大鼠,沉默miR-384-5p基因,建立急性心肌梗死(acutemyocardial infarction,AMI)模型,给予BCF预处理.以qRT-PCR法检测LncRNA MtIAT、miR-384-5p及自噬相关基因表达;采用双荧光素酶报告基因实验及RNA反义纯化(RNA antisense purification,RAP)实验验证LncRNA MIAT与miR-384-5p的靶向关系;采用ELISA法检测细胞上清液及大鼠血清中肌钙蛋白-Ⅰ(cardiactroponin-Ⅰ,cTn-Ⅰ)水平;采用CCK-8法检测细胞活力;采用透射电镜观察自噬小体数量;以自噬双标腺病毒Ad-mRFP-GFP-LC3感染细胞检测自噬流;采用TTC染色法检测大鼠心肌梗死面积;采用Western blotting法检测自噬相关蛋白表达.结果 与OGD组比较,BCF能够下调LncRNA MIAT并上调 miR-384-5p 基因表达(P＜0.05、0.01),提高心肌细胞活力(P＜0.01),降低 cTn-Ⅰ 水平(P＜0.001),下调 Beclin1、Cathepsin D、LC3基因及蛋白表达(P＜0.05、0.01),减少自噬小体数量(P＜0.01),减轻自噬流(P＜0.01).双荧光素酶报告基因及RAP实验结果显示,LncRNA MIAT靶向负调控miR-384-5p表达.敲低LncRNAMIA4T可抑制自噬,减轻心肌缺氧损伤;与单纯BCF预处理相比,敲低LncRNA MIAT可显著增强BCF抑制自噬和保护心肌的作用(P＜0.05、0.01、0.001).与AMI+BCF组比较,沉默miR-384-5p后给予BCF处理,大鼠心肌梗死面积显著增加(P＜0.01),血清中cTn-Ⅰ水平显著升高(P＜0.01),心脏组织中自噬相关基因及蛋白表达均显著上调(P＜0.01),心肌缺血损伤加重.结论 BCF通过LncRNA MIAT/miR-384-5p 抑制自噬,从而减轻心肌缺氧损伤.

关键词：九龙藤黄酮、LncRNA MIAT、miR-384-5p、心肌缺氧损伤、自噬

所属期刊栏目：53

分类号：R285.5(中药学)

资助基金：国家自然科学基金;国家自然科学基金

在线出版日期：2022-11-03（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共11页

页码：5701-5711