基于糖酵解机制的白头翁皂苷多成分协同抑制人肺癌NCI-H460细胞增殖作用研究

摘要：

目的 探讨白头翁皂苷中有效成分抑制人肺癌NCI-H460细胞增殖作用及其有效成分协同对肿瘤糖酵解机制的作用.方法 体外培养 NCI-H460细胞,以 MTT法检测白头翁皂苷中白头翁皂苷 A3(A3)、白头结皂苷 D(PSD)、白头翁皂苷B4(B4)、常春藤碱 C(HC)、常春藤碱D(HD)、常春藤皂苷元(HY)、白头翁皂苷 R13(R13)和白头翁皂苷 PSA(PSA)的抗肿瘤活性;通过 Calcusyn 3.0软件将筛选出的自头翁有效成分进行配伍及协同抗肿瘤作用研究;采用生物化学检测法和Elisa法检测糖酵解相关代谢产物(丙酮酸、乳酸、葡萄糖)和葡萄糖转运蛋白 1(GLUT1)、乳酸脱氢酶(LDHA)、M2型丙酮酸激酶(PKM2)和己糖激酶(HK)水平;运用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术和 Western blotting技术检测糖酵解相关 41个成员基因和关键蛋白细胞外调节蛋白激酶1/2(ERK 1/2)、Ras、GLUT1、单羟酸转运体 4(MCT4)的表达.结果 体外抗肿瘤结果显示,自头翁皂苷中以 PSD、R13 、PSA抑瘤活性最强,其对 NCI-H460细胞 IC50分别为 5.2、4.6、7.9μg/mL;运用 Calcusyn 3.0软件确定了白头翁皂苷中 3个有效单体成分配伍比例及判定了配伍后具有协同抗肿瘤效应;生化和 Elisa结果显示,与对照组比较,白头简单体组及联合组的丙酮酸、乳酸、葡萄糖、HK、PKM2,LDHA含量均明显降低,且 GLUT1含量明显升高(P＜0.05),与各单体组相比,其联合组的丙酮酸、乳酸、葡萄糖、HK、PKM2,LDHA含量均明显的降低,GLUT1含量明显升高(P＜0.05);qRT-PCR结果显示,单体联合组在网络图中节点最多,其作用靶点多于各个单体组;Western blotting结果显示,与对照组比较,白头翁单体联合组可显著性降低细胞ERK1/2、Ras、GLUT1、MCT4蛋白表达(P＜0.05).结论 白头翁皂背有效成分联用对NCI-H460细胞具有协同抗肿瘤作用,其可能通过调节肿瘤细胞糖酵解发挥抗肿瘤作用.

关键词：白头翁皂苷、协同抗肿瘤、糖酵解、NCI-H460细胞、葡萄糖转运蛋白1、乳酸脱氢酶、M2型丙酮酸激酶、己糖激酶、细胞外调节蛋白激酶1/2、Ras、单羟酸转运体4

所属期刊栏目：50

分类号：R285.5(中药学)

资助基金：国家自然科学基金资助项目;国家自然科学基金资助项目

在线出版日期：2020-03-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

页码：5289-5297