桑黄鲨烯环氧酶基因原核表达及过表达载体的构建

摘要：

目的 构建桑黄三萜生物合成途径中的关键酶——鲨烯环氧酶(squalene epoxidase,SE)基因的原核表达和过表达载体.方法 将克隆到的桑黄SE基因构建到原核表达载体pET-32a(+)上,转化大肠杆菌BL21 (DE3),使用异丙基硫代-β-D-呋喃半乳糖苷(IPTG)诱导表达2～10h后,通过SDS-PAGE进行检测.根据GenBank中提交的香菇3-磷酸甘油醛脱氢酶基因(gpd)启动子序列设计引物,利用PCR技术克隆获得香菇gpd启动子片段,以植物双元表达载体pCAMBIA1301为基础载体,通过酶切、连接等方法将其中的35 S启动子替换为香菇gpd启动子,再将SE基因编码区序列构建到gpd启动子下游,构建桑黄SE基因的过表达载体.结果 成功构建了SE基因的原核表达载体pET-32a-SE,SDS-PAGE结果显示该蛋白的大小约为55 000,与预测的蛋白相对分子质量基本一致.PCR检测、酶切鉴定和测序分析可知,成功构建了适宜食用菌遗传转化的中间载体pCAMBIA 1301-gpd-gpd及SE基因的过表达载体pCAMBIA1301-gpd-gpd-SE.结论 为后期研究SE基因在桑黄三萜生物合成方面所发挥的功能奠定基础.

关键词：桑黄、鲨烯环氧酶、原核表达、载体构建、PCR

所属期刊栏目：49

分类号：R282.12(中药学)

资助基金：中央高校基本科研业务费专项资金资助2572017CF01;哈尔滨学院青年博士科研启动基金项目HUDF2018105

在线出版日期：2018-08-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：2632-2639