NR6A1过表达腺病毒载体构建及在血管平滑肌细胞中的表达

摘要：

目的:构建核受体家族分子NR6A1重组腺病毒载体,观察NR6A1蛋白在血管平滑肌细胞中的表达.方法:从cDNA文库中,利用PCR方法钓取目的基因NR6A1,采用In-Fusion克隆技术将目的基因插入腺病毒穿梭质粒pDC315 -3FLAG,将重组质粒与辅助包装质粒pBHG lox △E1,3 Cre共转染HEK293细胞,整合包装成重组腺病毒.运用蛋白免疫印迹技术检测NR6A1蛋白表达水平；运用免疫荧光化学技术检测NR6A1蛋白在平滑肌细胞中的亚细胞定位.结果:通过In-Fusion技术获得pDC-NR6A1-3 FLAG阳性质粒,该质粒在HEK293细胞中重组成腺病毒Ad-NR6A1；蛋白免疫印迹技术发现pDC-NR6A1-3FLAG重组质粒及Ad-NR6A1均能够正确表达NR6A1蛋白；而且该蛋白定位于培养的血管平滑肌细胞核中.结论:In-Fusion技术能够高效克隆NR6A1基因,所构建的NR6A1过表达腺病毒能够正确表达NR6A1核蛋白,NR6A1定位于血管平滑肌细胞核中.

关键词：NR6A1、In-Fusion克隆、平滑肌细胞

所属期刊栏目：31

分类号：Q782(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家自然科学基金30900631;湖北省教育厅优秀中青年科技创新团队计划T201212

在线出版日期：2012-10-31（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：181-185,封2