稳定表达EGFR-GFP融合蛋白细胞系的建立

摘要：

目的:建立稳定表达EGFR-GFP融合蛋白的细胞系.方法:CaCl2法将pEGFR-EGFP质粒转化DH5α,酶切鉴定后提取质粒经电穿孔转染CHO-K1细胞;以EGFP作为荧光报告分子,克隆化培养以获取单克隆阳性细胞;流式细胞术、荧光显微镜术、Western Blot检测转染细胞EGFR-GFP融合蛋白的表达;比较稳定转染细胞及未转染细胞的生长曲线;反复冻存、复苏、传代鉴定细胞表达EGFR-GFP融合蛋白的稳定性.结果:获得1株稳定表达EGFR-GFP融合蛋白的细胞系,命名为CHO-EGFR-GFP1,融合蛋白主要表达于细胞膜.稳定转染细胞和未转染细胞生长特性无显著差异.结论:成功获得膜表面稳定表达EGFR-GFP融合蛋白的细胞系,为研制以EGFR为靶点的抗肿瘤药物以及研究EGFR与其配体间相互作用奠定了基础.

关键词：表皮生长因子受体、绿色荧光蛋白、细胞系

所属期刊栏目：25

分类号：R813.2(放射医学)

资助基金：科技部科研项目2002CB513109

在线出版日期：2006-08-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：129-132,封二