细菌内同源重组构建pAdeasy-1/hp27mt腺病毒质粒

摘要：

目的:采用细菌内同源重组法高效制备含hp27mt基因的重组腺病毒质粒.方法:hp27mt自载体pORF9-hp27mt中切出,亚克隆至腺病毒穿梭质粒pShuttle-CMV中,构成穿梭质粒pShuttle-CMV/hp27mt;然后再用经PmeI酶切的pshuttle-CMV/hp27mt转化含pAdeasy-1的超感受态BJ5183,采用细菌内同源重组法构建腺病毒质粒pAdeasy-1/hp27mt;筛选同源重组质粒阳性克隆,提取pAdeasy-1/hp27mt质粒经Pac Ⅰ酶切鉴定和PCR鉴定.结果:线性化的pShuttle-CMV/hp27mt转化含pAdeasy-1的超感受态 BJ5183,12-20h后获得了30%阳性重组质粒克隆,经酶切获得一大于20 kb的大片段和3.0 kb的特征性片段,PCR反应扩增出了275 bp的片段,证明重组腺病毒质粒中已成功插入目的基因hp27mt.结论:用细菌内同源重组法可制备含hp27mt的重组腺病毒质粒且经济高效、简便、快捷.为转染293细胞制备高滴度重组腺病毒提供高纯度的重组腺病毒质粒.

关键词：细菌、同源重组、重组腺病毒质粒、hp27mt

所属期刊栏目：22

分类号：Q784(基因工程（遗传工程）)

在线出版日期：2003-11-07（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：65-69