响应葡萄根瘤蚜侵染的扩展蛋白基因筛选及其多克隆抗体的制备

摘要：

以对葡萄根瘤蚜敏感的‘克瑞森无核’葡萄(Vitis vinifera‘Crimson Seedless’)组培苗和抗性砧木‘1103P’组培苗为试材,通过荧光定量PCR技术从扩展蛋白基因家族中筛选到经根瘤蚜侵染后表达上调的扩展蛋白基因家族成员VvEXPA1.采用RT-PCR方法克隆到VvEXPA1基因片段,连接至原核表达载体pET-32a中,转化大肠杆菌DE3菌株,测序确定构建的重组载体pET3 2a-VvEXPA1开放阅读框正确,并经IPTG诱导表达了融合蛋白.该蛋白以包涵体的形式存在,纯化后免疫新西兰兔,制备扩展蛋白多克隆抗体,通过Western-blot和ELISA检测抗体的特异性及效价.结果显示制备的抗体具有较高的特异性,ELISA显示效价为1∶51 200.

关键词：葡萄、根瘤蚜、扩展蛋白、VvEXPA1、多克隆抗体制备

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分类号：S663.1(果树园艺)

资助基金：国家自然科学基金项目31201609;山东省中青年科学家基金项目BS2012NY007;山东省自然科学基金项目ZR2013CQ022;高等学校博士学科点专项科研基金项目20113702120007

在线出版日期：2016-03-07（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：15-24