高质量提取柑橘样品中病原总核酸方法的建立

摘要：

针对柑橘老熟组织中富含多糖、多酚、色素和其它次生代谢产物的特点,以柑橘老叶老皮为试材,在传统CTAB提取法的基础上通过添加增效剂并优化配方,建立了一种快速、简便的提取植物老熟组织及其内部病原总核酸的CTAB-Triton提取法.新的提取液对细胞的裂解能力更强,且解决了传统CTAB溶液因低温析出而致DNA得率损失的弊端.比较了该法和微量葡聚糖柱纯化法制备模板时韧皮部杆菌的检出率,并用该法制备模板,分析了韧皮部杆菌在柚子叶片中的分布情况,及对其它几种柑橘病原菌进行PCR/RT-PCR检测.结果表明,CTAB-Triton方法能有效提取柑橘老熟叶片的DNA,所得DNA质量高,产量比商品化试剂盒大,提高了韧皮部杆菌的检出率,且可用于柑橘其他病原真菌、细菌,以及DNA或RNA病毒病害的PCR/RT-PCR检测,也可用于定量PCR检测和病原种群多态性分析.

关键词：柑橘、韧皮部杆菌、柑橘黄龙病、DNA提取、柑橘病害检测

所属期刊栏目：41

分类号：S666(果树园艺)

资助基金：公益性行业农业科研专项201003067,2010-2014;重庆市自然科学基金项目cstc2012jjA80025;重庆市两江学者项目2013

在线出版日期：2014-12-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：2342-2352