VASP基因RNA干扰慢病毒表达载体的构建与鉴定

摘要：

目的 构建靶向血管扩张刺激磷蛋白(VASP)基因RNA干扰慢病毒表达载体.方法 将前期构建的pcD-NA6.2-miRVASP进行测序鉴定,筛选阳性克隆.通过Gateway技术中的BP反应及LR反应,将携带miRVASP的表达框克隆至慢病毒目的载体pLenti6/V5-DEST,构建靶向VASP基因的RNA干扰慢病毒表达载体pLenti6/V5-miRVASP;接着将其与慢病毒包装混合物共转染293FT细胞,收集病毒颗粒,侵染胃癌BGC-823细胞.结果 慢病毒表达载体测序结果表明,构建的载体与预期完全一致.用收集的携带miRVASP表达框的慢病毒颗粒侵染BGC-823细胞,荧光显微镜下可见多量细胞表达强绿色荧光,证明包装产生的慢病毒颗粒能侵染BGC-823细胞.结论 成功构建了靶向VASP基因的RNA干扰慢病毒表达载体,并包装产生慢病毒颗粒原液,成功侵染BGC-823细胞,为进一步在体内实验中研究VASP在胃癌侵袭转移中的作用奠定了基础.

关键词：血管扩张刺激磷蛋白、RNA干扰、慢病毒载体

所属期刊栏目：15

分类号：R737(肿瘤学)

资助基金：湖北省自然科学基金项目2014CFB340

在线出版日期：2018-10-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：9-12