VEGF干扰慢病毒载体的构建及其在MHCC97L细胞中的表达

摘要：

目的 构建VEGF基因RNA干扰(RNAi)慢病毒载体并实现其在人肝癌细胞MHCC97L中表达.方法 根据人VEGF基因序列,设计并合成包含靶序列的互补DNA链,连接线性化的plenti6.3-MIR载体,构建miRNA慢病毒载体质粒,并转化至感受态细胞DH5α,进行测序验证.在脂质体介导下转染293T细胞,包装生产慢病毒,测定其滴度.慢病毒载体转染人肝癌细胞MHCC97L,用Real-time PCR检测RNAi组(MHCC97-200)、阴性对照组(MHCC97-NEGA)和空白对照组(MHCC97-空白)中VEGF的表达情况,确定其干扰VEGF表达的有效性.结果 测序证实慢VEGF基因RNAi病毒载体质粒构建成功.慢病毒载体经293T细胞包装成功,测定病毒的滴度为3.23×109 TU/mL.慢病毒载体转染人肝癌细胞MHCC97L 48 h后,VEGF基因在mRNA水平抑制了72.2%.结论 VEGF基因RNAi慢病毒载体构建成功,并实现在人肝癌细胞MHCC97L中的表达.

关键词：VEGF基因、慢病毒载体、RNA干扰、MHCC97L细胞

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分类号：R318(医用一般科学)

资助基金：国家自然科学基金81001524;北京中医药大学自主选题项目2011JYBZZJS-020

在线出版日期：2013-03-21（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：11-13