一种细胞内快速标记邻近蛋白复合物的新方法

摘要：

目的 构建可诱导、细胞适用性广的细胞内快速标记邻近蛋白复合物新方法.方法 体外合成TurboID编码基因,并与Tet-on系统一并插入改造后的慢病毒载体,病毒包装后侵染HeLa细胞以融合表达TurboID及目的蛋白YB1或对照蛋白GFP.使用不同浓度的强力霉素处理细胞24h以诱导融合蛋白的表达,加入50μmol/L生物素继续培养15～120min以使Tur-boID将临近蛋白进行生物素标记,免疫印迹法检测生物素标记的蛋白含量.结果 成功构建了可诱导的TurboID融合表达慢病毒载体.获得的病毒侵染HeLa细胞,应用0.125μg/ml以上的强力霉素即可诱导细胞产生TurboID融合蛋白.生物素处理15min以上可得到大量生物素标记的蛋白.结论 构建了快速标记邻近蛋白复合物的检测体系——TurboID系统,该系统具有可诱导、生物素标记迅速及细胞适用性广等优点,可广泛应用于大多数动物及人体细胞内蛋白复合物的筛查研究.

关键词：邻近蛋白标记、TurboID、蛋白复合物、生物素化、载体构建

所属期刊栏目：49

分类号：R331(人体生理学)

资助基金：国家自然科学基金资助项目81971323,31371280

在线出版日期：2020-06-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：26-30